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Caspase活性檢測相關(guān)問題解答點(diǎn)擊次數(shù)：3321 更新時(shí)間：2012-02-01
Caspase活性檢測相關(guān)問題解答
答：Caspase活性測試為在細(xì)胞裂解液中檢測蛋白酶活性提供了簡捷方便的手段。當(dāng)對專一Caspase的多肽底物被裂解時(shí)，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測定。將從細(xì)胞凋亡樣本得到的信號(hào)同未經(jīng)誘導(dǎo)的對照樣本進(jìn)行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數(shù)，而Caspase酶活性是同檢測到的信號(hào)直接成正比。
2：Caspase活性測試是否可用于定量檢測？
答：R&D Systems的Caspase活性測定試劑盒可作為半定量測試。檢測結(jié)果用于測量在細(xì)胞凋亡細(xì)胞中與未經(jīng)誘導(dǎo)細(xì)胞中的Caspase活性倍數(shù)的增加。實(shí)驗(yàn)時(shí)，采用本底對照(無細(xì)胞裂解液或無底物的反應(yīng))。如果本底對照也有一定的讀數(shù)，這一讀數(shù)應(yīng)當(dāng)在記算倍數(shù)增加之前從試驗(yàn)數(shù)據(jù)中差減。
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3：Caspase活性檢測同Caspase ELISA試劑盒有何不同？
答：Caspase活性檢測用于測定不同Caspase的蛋白酶的活性，表達(dá)為比未誘導(dǎo)樣本的倍數(shù)增加。Caspase ELISA試劑盒用于測定不同Caspase在樣本中的含量，以pg /mL定量表達(dá)。
4：caspase X 活性測試是對caspase X專一的嗎？
答：大多數(shù)caspase會(huì)裂解所有的底物，它們根據(jù)Michaelis-Menton動(dòng)力學(xué)趨于選擇某一底物而非另一底物，但沒有任何底物是對某一Caspase專一的。比如，Caspase 3和Caspase 7都可裂解DEVD底物；Caspase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&D Systems為每一Caspase選擇了它所適宜的底物。如果反應(yīng)進(jìn)行的太久，一些Caspase會(huì)激活另一些Caspase。
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5：Caspase活性檢測試劑盒中的細(xì)胞裂解液是否同其它試劑盒中的一樣？
答：所有的Caspase活性檢測試劑盒中的細(xì)胞裂解液都是一樣的。所以，可用它裂解細(xì)胞，和用于多種Caspase活性的測試。
6：R&D Systems的Caspase抑制劑是否可逆？
答：所有R&D Systems的Caspase抑制劑在N端有苯甲氧碳基(Z-)和FMK功能組，它們可穿孔細(xì)胞，是不可逆轉(zhuǎn)的。
答：R&D Systems提供多種重組Caspase酶，它們是理想的陽性對照。如果試驗(yàn)者自己想建立一陽性對照，有許多可以產(chǎn)生細(xì)胞凋亡的陽性對照的方法都已發(fā)表。如果將細(xì)胞同2 mM星形孢菌素(Staurosporin)溫育2小時(shí)，可誘導(dǎo)絕大多數(shù)細(xì)胞類型進(jìn)入細(xì)胞凋亡。R&D Systems有文獻(xiàn)資料列舉了對Caspase如何產(chǎn)生陽性對照，可向我們的技術(shù)服務(wù)索取。
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