流式細(xì)胞儀介紹

流式細(xì)胞儀就是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器，它集電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論于一體，是一種非常先進(jìn)的檢測(cè)儀器，被譽(yù)為試驗(yàn)室的“CT”。

流式細(xì)胞術(shù)（Flow CytoMeter, FCM）是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)代的細(xì)胞定量分析技術(shù)。

工作原理

將待測(cè)細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液。用一定壓力將待測(cè)樣品壓入流動(dòng)室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管?chē)姵?，鞘液管入口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形的流束，待測(cè)細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過(guò)檢測(cè)區(qū)域。 　　流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號(hào)同時(shí)被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè)，這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大?。粺晒庑盘?hào)的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過(guò)一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。 　　這些熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，再通過(guò)模／數(shù)轉(zhuǎn)換器，將連續(xù)的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)。計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理，將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上，液可以打印出來(lái)，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲(chǔ)在硬盤(pán)上以備日后的查詢(xún)或進(jìn)一步分析。

檢測(cè)數(shù)據(jù)的顯示視測(cè)量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá)，其X軸為測(cè)量強(qiáng)度，Y軸為細(xì)胞數(shù)目。一般來(lái)說(shuō)，坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù)，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對(duì)于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨(dú)顯示每個(gè)參數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點(diǎn)圖、等高線(xiàn)圖、灰度圖或三維立體視圖。

細(xì)胞的分選是通過(guò)分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。

應(yīng)用范圍

可用于白血病的分型、腫瘤細(xì)胞染色體的異倍性測(cè)定，以及免疫學(xué)研究，并已開(kāi)始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識(shí)別合愛(ài)滋病感染者T4、T8細(xì)胞的記數(shù)。

自70年代以來(lái)，隨著流式細(xì)胞技術(shù)水平的不斷提高，其應(yīng)用范圍也日益廣泛。流式細(xì)胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

技術(shù)特點(diǎn)

作為一種的細(xì)胞定量分析檢測(cè)儀器，設(shè)計(jì)上采用了許多*的技術(shù)，其中涉及到液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號(hào)測(cè)量和細(xì)胞分選等4個(gè)方面。

展望

從細(xì)胞技術(shù)開(kāi)始發(fā)展到今天，60年代至70年代是其飛速發(fā)展時(shí)期，激光技術(shù)、噴射技術(shù)以及計(jì)算機(jī)的應(yīng)用使在原理和結(jié)構(gòu)上形成了固定的模式。

80年代則是的商品化時(shí)期，這期間不斷有新型號(hào)的儀器推出，在多參數(shù)檢測(cè)技術(shù)上不斷提高。

進(jìn)入90年代，隨著微電子技術(shù)特別是計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，計(jì)算能力不斷提高，的功能也越來(lái)越強(qiáng)大。在數(shù)據(jù)管理、數(shù)據(jù)分析方面有了長(zhǎng)足進(jìn)步。但是，在技術(shù)原理和設(shè)計(jì)方面并沒(méi)有突破性的進(jìn)展。人們的注意力開(kāi)始轉(zhuǎn)向的應(yīng)用，新的熒光探針、新的熒光染料、新的染色方法不斷推出，使流式細(xì)胞技術(shù)在新的細(xì)胞參數(shù)分析方面日益發(fā)展。

從新推出的儀器看，會(huì)在硬件上不斷更新，采用更新的器件（入半導(dǎo)體激光、大規(guī)模集成電路），以實(shí)現(xiàn)小型化；用數(shù)字電路取代模擬電路，充分發(fā)揮微處理器的功能以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單化；在軟件上提高數(shù)據(jù)自動(dòng)分析能力，充分發(fā)揮圖形界面的優(yōu)點(diǎn)，使操作更加簡(jiǎn)便。