凋亡試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。
 

　　一、凋亡試劑盒的細(xì)胞凋亡原理：
 

　　細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界，既發(fā)生于生理狀態(tài)下，也發(fā)生于病理狀態(tài)下。細(xì)胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生(morphogenesis)、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng)、疾病或中毒時(shí)引起的細(xì)胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用。
 

　　在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35.8KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素FITC標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
 

　　二、凋亡試劑盒的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象：
 

　　細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
 

　　細(xì)胞凋亡過程的形態(tài)變化說明
 

　　細(xì)胞凋亡是個復(fù)雜的過程，我們在了解分析它的同時(shí)在記錄著它的細(xì)胞變化形態(tài)，由此我們將其變化的過程分為三個大的階段：
 

　　1.首先是是細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，核糖體、線粒體等聚集，但結(jié)構(gòu)無明顯改變，染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，嗜堿性增強(qiáng)，核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂，胞膜仍完整
 

　　2.其次就是胞膜不斷出芽、脫落，細(xì)胞變成數(shù)個大小不等的由膜包裹的凋亡小體(apoptotic bodies)。
 

　　3.凋亡小體被周圍具有吞噬功能的細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞等吞噬、降解。在凋亡發(fā)生的全過程中，細(xì)胞膜一直保持完整，胞內(nèi)容物不釋放出來，所以不引起周圍的炎癥反應(yīng)。同一組織中，不同細(xì)胞發(fā)生凋亡的過程并不同步。