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多了解一些,才能更好地運(yùn)用凋亡試劑盒點擊次數(shù):1170 更新時間:2022-07-12

  凋亡試劑盒的細(xì)胞凋亡過程中可觀察到系列形態(tài)學(xué)特征和生化特征。早期凋亡信號的效應(yīng)產(chǎn)生于胞內(nèi),此時細(xì)胞膜保持完整。目前已有幾種方法以檢測凋亡細(xì)胞胞內(nèi)的多種效應(yīng),包括:DNA段的檢測、膜對稱性的變化、caspases激活、以及細(xì)胞死亡相關(guān)蛋白水平的變化等。多數(shù)檢測使用的底物和Marker適用于絕大多數(shù)種類的哺乳動物。
 
  凋亡細(xì)胞染色體DNA以核小體為單位的切割導(dǎo)致細(xì)胞不可逆死亡。可以采用NucleosomeELISA,對產(chǎn)生的單體及寡聚核DNA段進(jìn)行定量。核小體的DNA成分被捕獲于酶標(biāo)板上,使用標(biāo)記的抗組蛋白抗體檢測捕獲的核小體數(shù)量。組蛋白-DNA段的量反應(yīng)了一個特定樣品中死亡及瀕臨死亡的細(xì)胞的量。
 
  DNA段也可通過片段末端標(biāo)記進(jìn)行原位檢測,MERCK提供基于TUNEL方法的試劑盒。DNA段末端標(biāo)記可通過熒光染料或比色底物方法進(jìn)行檢測。另外,細(xì)胞形態(tài)的變化如胞膜皺摺或出泡、核染色質(zhì)致密、胞質(zhì)濃縮等,都可作為細(xì)胞凋亡的證據(jù)。采用熒光染料進(jìn)行末端標(biāo)記的可用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行定量,其光散射變化也可支持由單一參數(shù)得出的結(jié)論。DNA段可以從凋亡細(xì)胞中分離并使用瓊脂糖電泳進(jìn)行分析。約180bp的多倍寡核小體片段在電泳上呈典型的梯狀條帶,可進(jìn)一步證實凋亡的存在。若使用PelletPaintCo-Precipitant,只需室溫操作,兩分鐘即幫助DNA沉淀更快捷方便。
 
  線粒體膜電位和膜通透性的變化也是凋亡細(xì)胞一個重要特點。凋亡細(xì)胞另一個生化特征是細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰*從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外。膜聯(lián)蛋白中的AnnexinⅤ,是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰有強(qiáng)親和力。通過使用AnnexinⅤ-FITC(PF032)或AnnexinⅤ-BiotinApoptosisDetectionKit,及RAPIDTM方法進(jìn)行凋亡細(xì)胞早期檢測??墒褂昧魇郊?xì)胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測。同時使用PI,根據(jù)細(xì)胞膜的通透性區(qū)分早期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。
 
  凋亡試劑盒的凋亡過程中細(xì)胞核同樣發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化。接收到凋亡信號后,核基質(zhì)蛋白(NMPs)釋放。NMP的釋放與細(xì)胞死亡相,MERCK的CellDeathDetection(NMP)ELISA可定量檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的NMP水平變化。此種檢測方法優(yōu)于其它方法的原因在于可以直接檢測組織培養(yǎng)基中NMPs的水平,而不需細(xì)胞總裂解物,從而避免了細(xì)胞計數(shù)和樣品準(zhǔn)備等操作。除了結(jié)構(gòu)變化,凋亡細(xì)胞*水平會降低,可通過GlutathioneApoptosisAssayKit進(jìn)行檢測。
 
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