蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)提高雜交信號(hào)。但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí)都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題,并能達(dá)到理想的染色效果。
蛋白酶K的用途及應(yīng)用:
1.蛋白酶K可用于質(zhì)?;蚧蚪MDNA、RNA的分離,是DNA提取的重要試劑;
2.亦可裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。并且可以滅活病毒,讓病毒的蛋白變性,失去活性而“死掉”,不再有傳染性,提高運(yùn)輸和檢測(cè)階段的安全性;
3.同時(shí)蛋白酶K也能夠應(yīng)用到皮革工業(yè)、肉類嫩化、滅活生活以及工業(yè)用水中的細(xì)菌,優(yōu)點(diǎn)是消毒劑本身無(wú)害,而且不產(chǎn)生有害消毒產(chǎn)物,所以這是一種高效環(huán)保的方法。
蛋白酶K的存放方法:
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。
使用方法:孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。