Elisa試劑盒為雙抗體夾心法檢測抗原RBD蛋白，酶標板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物，檢測時酶標板孔加入待檢樣品或標準品(哺乳動物重組表達RBD蛋白)，再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應后加入鏈霉親和素HRP，較后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白，TMB底物液在HRP催化下顯色，加入終止液終止顯色后，在酶標儀OD450/OD630讀取吸光值，吸光值大小與待檢測樣品中RBD蛋白濃度呈正相關，根據(jù)標準品濃度/吸光值繪制的標準曲線，可計算出待檢樣品中RBD蛋白含量。
 

　　Elisa試劑盒的樣品收集:
 

　　1.血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
 

　　2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
 

　　3.組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。較后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
 

　　4.細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。
 

　　5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。
 

　　6.樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。
 

　　7.樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(6個月內(nèi)檢測)，避免反復凍融。
 

　　8.如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品較高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
 

　　Elisa試劑盒的洗滌方法:
 

　　1.自動洗板機：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。
 

　　2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。