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流式抗體的選購(gòu)需要考慮哪幾個(gè)方面?點(diǎn)擊次數(shù):1379 更新時(shí)間:2020-08-25

 流式抗體的選擇:
  1 流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇較基本的條件:目標(biāo)蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
  2 流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過(guò)程,以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記。
  3 流式抗體熒光標(biāo)記的選擇:如果實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單一指標(biāo):不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。FACS Calibur儀器為例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常來(lái)說(shuō),PE較強(qiáng),適用于弱表達(dá)抗原。FITC強(qiáng)度較弱,適用于強(qiáng)表達(dá)抗原,使用范圍比較廣。用戶需根據(jù)檢測(cè)的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。如果同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo):確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道:流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。
  如:實(shí)驗(yàn)者同時(shí)檢測(cè)三個(gè)指標(biāo),可以在圖1中綠色、黃色和紅色三個(gè)通道中各選一個(gè)適當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記,F(xiàn)ITC、PE和PE-cy5。切忌所有指標(biāo)選擇同一個(gè)通道的熒光標(biāo)記,以防止熒光的重疊和相互干擾,影響較后結(jié)果。因此,流式細(xì)胞儀的通道越多,同一份樣本能同時(shí)做的表面/胞內(nèi)標(biāo)志就越多。常用熒光標(biāo)記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
  同型對(duì)照的選擇:
  流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和其他抗體相關(guān)實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)不同的就是需要選擇同型對(duì)照。同型對(duì)照,是用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色,相當(dāng)于實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照。同型對(duì)照選擇與標(biāo)記抗體同種屬來(lái)源,同亞型,同熒光標(biāo)記的抗體。比如:抗人的CD3的PE標(biāo)記的抗體,小鼠的IgG2a。同型對(duì)照選擇PE標(biāo)記的小鼠的IgG2a。
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