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流式抗體的選擇需要考慮哪些要素?點擊次數:1511 更新時間:2020-03-12

      由于在流式細胞實驗過程中,熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數據質量。因此,需要考慮各種影響流式抗體品質及檢測效果的因素,例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。
  流式抗體的選擇:
  1、流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇較基本的條件:目標蛋白特異性,反應種屬以及應用實驗。
  2、流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中,盡量減少實驗工序和過程,以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內,建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做間接標記。
  3、流式抗體熒光標記的選擇:如果實驗中檢測單一指標:不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。FACS Calibur儀器為例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常來說,PE較強,適用于弱表達抗原。FITC強度較弱,適用于強表達抗原,使用范圍比較廣。用戶需根據檢測的目標蛋白進行具體選擇。如果同時檢測多個指標:確認流式細胞儀能檢測多少個通道:流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。
  如:實驗者同時檢測三個指標,可以在圖1中綠色、黃色和紅色三個通道中各選一個適當的熒光素標記,FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指標選擇同一個通道的熒光標記,以防止熒光的重疊和相互干擾,影響結果。因此,流式細胞儀的通道越多,同一份樣本能同時做的表面/胞內標志就越多。常用熒光標記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
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