細(xì)胞因子是由細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質(zhì)的統(tǒng)稱。在免疫應(yīng)答過程中,細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起重要作用。細(xì)胞因子的檢測不僅是基礎(chǔ)免疫研究的有較手段,同時(shí)在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測方面具有重要價(jià)值。
但是,由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微,給細(xì)胞因子的檢測帶來困維,細(xì)胞因子的檢測尚未在臨床診斷上廣泛開展,已知目前采用的細(xì)胞因子檢測方法均不完善,且不同的檢測方法所得的結(jié)果差異較大,給臨床診斷與治療帶來一定的困難。因此,有必要了解各種檢測方法的特性及影響因素。
目前,細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測和濃度測定方法主要有以下幾類:
一.生物學(xué)檢測法
生物學(xué)檢測又稱生物活性檢測,是根據(jù)細(xì)胞因子特定的生物活性而設(shè)計(jì)的檢測法。由于各種細(xì)胞因子具有不同的活性,例如IL-2促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,TNF殺傷腫瘤細(xì)胞,CSF刺激造血細(xì)胞集落形成,IFN保護(hù)細(xì)胞免受病毒攻擊,因此選擇某一細(xì)胞因子*的生物活性,即可對(duì)其進(jìn)行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類:
1.細(xì)胞增殖法
許多細(xì)胞因子具有細(xì)胞生長因子活性,特別是白細(xì)胞介素,如IL-2刺激t細(xì)胞生長、IL-3刺激肥大細(xì)胞生長、IL-6刺激漿細(xì)胞生長等。利用這一特性,現(xiàn)已篩選出一些對(duì)特定細(xì)胞因子起反應(yīng)的細(xì)胞,并建立了只依賴于某種因子的細(xì)胞系,即依賴細(xì)胞株(簡稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活,只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡,而加入IL-2后則可右體外長期培養(yǎng)。在一定濃度范圍內(nèi),細(xì)胞增殖與IL-2量呈正比,因此通過測定細(xì)胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外,還有一些短期培養(yǎng)的細(xì)胞,如胸腺細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、促有絲分裂原刺激后的淋巴母細(xì)胞等,均可作為靶細(xì)胞來測定某種細(xì)胞因子活性。
2.靶細(xì)胞殺傷法
是根據(jù)某些細(xì)胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細(xì)胞而設(shè)計(jì)的檢測方法。通常靶細(xì)胞多選擇體外長期傳代的腫瘤細(xì)胞株,利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細(xì)胞的殺傷率。
3.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法
某些
細(xì)胞因子可刺激特定細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì),如IL-2、IL-3誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞合成胺、IL-6誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應(yīng)產(chǎn)物,可反映細(xì)胞因子的活性