為了更好地使用
凋亡試劑盒,在使用
凋亡試劑盒前需要了解其工作原理,下面來說明下其工作原理:
在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與DNA斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TerminaldeoxynucleotidylTransferase)可以將地高辛標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至3’-OH末端,DIG-dUTP結(jié)合在DNA斷點(diǎn)部位,可以通過生物標(biāo)記的抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合鏈酶親和素-過氧化物酶(SABC),然后加入顯色底物DAB予以顯示。凋亡的細(xì)包核呈黃色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。
凋亡試劑盒的注意事項(xiàng):
1.試劑盒嚴(yán)格-20℃存放。
2.初用時(shí)如試管底部無可見的試劑,在離心機(jī)離心5分鐘,使試劑沉至管底。
3.檢測過程中切勿使樣品干涸。