標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法
標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB)
標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB法)是標(biāo)記的卵白素技術(shù),20世紀(jì)80年代開始采用。
基本試劑:
① *抗體;
② 生物素化第二抗體;
③ 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素。
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 將固定后的標(biāo)本用PBS漂洗;
2. 于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min,用來(lái)密封內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;
3. TBS漂洗3次,每次1min;
4. 在室溫下用二抗的正常血清孵育20min;
5. 滴加一抗后在室溫下放置1h或4℃冰箱內(nèi)過(guò)夜;
6. TBS漂洗3次,每次1min;
7. 滴加二抗后于室溫放置30min;
8. 將標(biāo)本于生物素化的第二抗體在室溫孵育10min;
9. TBS沖洗3次,每次1min;
10. 再與稀釋的LSAB在室溫孵育10min;
11. 重復(fù)步驟9;
12. 用DAB或AEC顯色;
13. 用蒸餾水反復(fù)沖洗;
14. 用蘇木精復(fù)染;
15. 封片;
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