在細(xì)胞培養(yǎng)的實驗中,難免會遇到這樣那樣的問題,比如細(xì)胞不貼壁、HP值變化迅速、細(xì)胞凋亡、等等。
細(xì)胞生長緩慢
1.培養(yǎng)基或血清改變:比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異;通過生長實驗比較新老批次血清有無差異;增大細(xì)胞初始接種密度;使細(xì)胞逐步適應(yīng)新的培養(yǎng)基。
2.必需生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺或生長因子)耗竭、缺乏或分解:去除原培養(yǎng)基,加入新鮮培養(yǎng)基;向培養(yǎng)基中添加生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺)。
3.輕度細(xì)菌或真菌污染:在不添加抗生素的條件下進(jìn)行培養(yǎng),如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。
4.時間存儲不當(dāng):血清應(yīng)于-5℃至-20℃下儲存;培養(yǎng)基應(yīng)于2℃~8℃下避光儲存;盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時間。
5.細(xì)胞初始接種密度低:增大活細(xì)胞接種密度。
6.細(xì)胞衰老、老化:將老化細(xì)胞丟棄,取用代數(shù)較少的細(xì)胞。
7.支原體污染:隔離細(xì)胞,檢測是否感染支原體;清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱,如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。