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常用培養(yǎng)基的制備點擊次數(shù):2096 更新時間:2016-11-16

培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。以下介紹培養(yǎng)基的制備流程:
一、配料
培養(yǎng)基處方準確稱取各種成分,先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水,再加入各種成分,以防蛋白胨等粘附于瓶底,然后再以剩余的水沖洗瓶壁。
二、溶化
將各種成分混勻于水中,以流通蒸氣溶化半小時,如在電爐上溶化應隨時攪拌,如有瓊脂成分時更應注意防止外溢。溶化完畢,補足失去的水分。
三、矯正pH
1.pH測定
取與標準管同口徑的試管(通常用華氏試管)3支,于第1、3管各加入欲測定pH的的培養(yǎng)基5ml,并于管中加入0.2g/L的酚紅0.25ml作為測定管,混勻;于第2管加入蒸餾水5ml,第4管為pH標準比色管。
2.pH的校正
若測定管過酸或過堿可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液矯正,直至顏色與標準管相同為止,加堿或加酸時要緩慢,每加1滴后要充分混勻,比色后再加第2滴(有時僅加半滴)準確記錄加入的量。
3.計算
設5ml培養(yǎng)基矯正pH至7.4時需0.1mol/L氫氧化鈉0.15ml,現(xiàn)有培養(yǎng)基4990ml,需加氫氧化鈉的量可按下列方法計算:5∶4990=0.15∶X
X=0.15×4990/5=149.7(ml)
如將此0.1mol/L的氫氧化鈉改用1mol/L的氫氧化鈉時,則需14.9ml即可醫(yī)學教育網(wǎng)搜集|整理。
四、過濾澄清
培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn),需過濾成清晰透明后方可使用,常用的過濾方法如下:
1.液體培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基必須清晰,以便觀察細菌的生長情況,常用濾紙過濾,亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白)在100℃加熱后保持60~70℃,40~60分鐘,使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。
2.固體培養(yǎng)基
如系瓊脂培養(yǎng)基,于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾;亦可用自然沉淀法,即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi),以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘后,靜置高壓鍋內(nèi),次日將瓊脂傾出,用刀將底部沉渣切去,再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。
五、分裝
1.根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。
2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5,滅菌后須趁熱放置成斜面,斜面長約為試管長的2/3
3.半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1/3,滅菌后直立凝固待用。
4.高層瓊脂分裝量約為試管的1/3,滅菌后趁熱直立,待冷后凝固待用。
5.液體培養(yǎng)基分裝于試管中,約是試管長度的1/3.
6.瓊脂平板:將滅菌(或加熱融化)后的培養(yǎng)基冷至50℃左右,以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約13~15ml,輕搖平皿底,使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部,待凝固后即成,傾注培養(yǎng)基時,切勿將皿蓋全部啟開,以免空氣中塵埃及細菌落入。
新制成的平板培養(yǎng)基(簡稱平板),表面水分較多,不利于細菌的分離,通常應將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用。
六、滅菌
不同成分、性質(zhì)的培養(yǎng)基,可采用不同的滅菌方法。高壓蒸汽滅菌法:高壓滅菌的溫度與時間隨培養(yǎng)基的種類及數(shù)量的不同有所差別,
一般培養(yǎng)基少量分裝時高壓(103.43kPa)滅菌15分鐘即可,培養(yǎng)基分裝量較大時,可高壓(103.43kPa)滅菌30分鐘,含糖的培養(yǎng)基高壓(55.16kPa)滅菌15分鐘。以免糖類被破壞。
七、檢定
每批培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用,檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時后,證明無菌,同時用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上生長繁殖及生化反應情況,符合要求者方可使用。
八、保存
制好的培養(yǎng)基,不宜保存過久,以少量勤做為宜。每批應注明名稱,分裝量,制作日期等,放在4℃冰箱內(nèi)備用。

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