細(xì)胞裂解方法包括化學(xué)裂解、酶裂解和機(jī)械裂解。化學(xué)裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會(huì)很少使DNA斷裂。這兩種方法(包括SDS和溶菌酶處理等)提取純化DNA中常用的方法。機(jī)械裂解可以更均一的裂解細(xì)胞,同化學(xué)裂解相比,機(jī)械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機(jī)械處理可以更劇烈和全面的裂解細(xì)胞,但也會(huì)造成DNA的斷裂。常用的方法是裂解液處理法
細(xì)胞裂解液的主要目的:1.利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層,破裂細(xì)胞;2. 溶解蛋白;3. 蛋白變性使其穩(wěn)定;4. 抑制蛋白酶活性
含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞,使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。它具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.快速裂解,多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化,能快速使細(xì)胞裂解。
2.能程度地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,還可以用于蛋白活性檢測(cè)(信號(hào)傳遞研究和酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè))和Western Blot等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3.裂解細(xì)胞的效率更高,主要用于對(duì)抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),還可以用于Western Blotting。適用于培養(yǎng)細(xì)胞(包括懸浮細(xì)胞)和新鮮組織。