制備高特異性、價的抗體是實驗免疫學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ),抗體質(zhì)量的高低將直接影響試驗的成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起,為了獲得成分相對單一的抗體或?qū)⒖贵w用于特定的用途,就需要進(jìn)行抗體純化??贵w純化分了幾種類型,根據(jù)用途決定選擇哪種方法進(jìn)行純化:
1. 粗純:將制備抗體的血清或是腹水,細(xì)胞上清,直接用鹽析法進(jìn)行處理,這樣可以將這些物質(zhì)里面的其他雜質(zhì)去掉,獲得蛋白的成分,但是由于是粗純,里面會混有大量的其他蛋白,這樣獲得的抗體,純度較低,用于實驗中背景比較高。
2.通用型純化:用抗體結(jié)合蛋白Protein A,Protein G或者Protein L。因為不同來源的抗體和這些抗體結(jié)合蛋白的結(jié)合能力不同,所以需要根據(jù)抗體來源選擇使用哪種抗體將誒和蛋白。對于有一些單鏈抗體,則多半使用protein L來進(jìn)行純化。經(jīng)過抗體結(jié)合蛋白的親和純化后,溶液中基本只保留了抗體的成分,其他蛋白都去掉了,抗體純度可以比較高。相對來說,這種方法是大規(guī)??贵w制備中,用得zui多的純化方法,很多抗體公司都采用這種方法來對抗體進(jìn)行純化。
3.特異型純化:但是有些抗體,需要純度特別高,特異性特別好,就不能簡單采用上述兩種方法進(jìn)行純化了。必須要通過將抗原固定制備成特異的親和純化柱,再純化抗體。這個時候得到的就全是針對一種抗原的抗體了,特異性。當(dāng)然,由于牽涉到抗原固定等操作,成本相應(yīng)是的。